内容提要

单粒子跟踪（SPT）已成为监测活细胞中膜蛋白动态的有力工具。SPT的永久标记策略受到光漂白的主要限制，限制了观察时间，并阻碍了对单个活细胞内长期细胞过程的研究。我们使用可交换HaloTag配体（xhtml）作为一种易于应用的活细胞SPT标记方法，并证明了单个活细胞的观察时间延长至30分钟。利用xhtml /HaloTag7标记系统，我们测量了单个活细胞中表皮生长因子受体（EGFR）的配体诱导激活动力学。我们生成了细胞中受体扩散的空间图，报告了受体激活的非均匀分布，以及EGFR激活的空间受限“热点”的形成。此外，我们测量了内质网腔蛋白钙网蛋白在活细胞中的迁移率，并发现了与内质网纳米结构相关的扩散系数。