化学发光具有消除激发光和最小的自身荧光干扰，已广泛应用于生物传感和生物成像。然而，传统CL探针的发射主要在400 ~ 650 nm范围内，导致在生物物体中的分辨率和穿透性不理想。因此，在近红外窗口[NIR，包括NIR-Ⅰ(650 ~ 900 nm)和近红外-Ⅱ (900 ~ 1700 nm)]中开发CL分子具有成像时间长、响应灵敏、毫米深度分辨率高的独特优势，迫在眉睫。然而，目前尚未见NIR-II CL单分子探针的报道。在此，作者开发了H₂S激活的NIR-II CL探针[化学发光供体950，(CD950)]，通过分子内CL共振能量转移策略，将两个具有高化学能的Schaap的二西烷供体与一个NIR-II荧光团受体候选共价连接，从而实现了95%的高效率。CD-950在长时间成像(~60 min)、深层组织穿透(~10 mm)和生理条件下H₂S特异性反应等方面表现出优异的能力。更重要的是，CD-950显示出对二甲双胍诱导的肝毒性的检测能力，其信号背景比比NIR-II荧光模式高2.5倍。单分子NIR-II CL探针在体内追踪其代谢产物评估药物副作用方面具有巨大潜力，进一步促进了基于NIR-II CL的新型检测平台的合理设计。