传统的小分子荧光探针通常基于单一位点的反应，对低活性物质响应不佳，同时生物体内的共存物往往会干扰，产生假阳性信号，造成灵敏度与选择性不足。多识别位点的小分子荧光探针具有的多个识别位点好比多把特异性的锁，只有待测物携带的多把钥匙一一解锁才能完成响应，实现高选择性的分析；同时多个位点的存在增大了探针捕捉待测物的几率，进而提高了反应的灵敏度，能够实现对低活性物质的检测，很好的弥补了传统单一位点探针的缺憾。本综述归纳了目前设计多识别位点小分子荧光探针的一般范式，并总结了近期多位点荧光探针在儿茶酚胺类、硫醇类、ATP等生物小分子的应用。