将探针与先进的成像技术相结合，实现了基于单器定位的超分辨率成像，彻底改变了我们以前所未有的精度研究亚细胞分子的能力。本文综述了小分子探针的设计和应用，以及超分辨率成像技术的进展。综述了超分辨率成像技术的工作原理、技术进展和独特的优点。我们还概述了创新的探针设计策略，可以增强我们对亚细胞分子动力学及其单细胞器定位的理解。本文还提供了针对不同细胞器内分子的探针设计策略，强调需要考虑光稳定性、信噪比和靶向结合等因素。本文还详细讨论了与该领域相关的挑战、潜在的解决方案和前景。通过将探针设计与基于单细胞器定位的最先进成像技术相结合，本综述为在最复杂的分子相互作用水平上揭示单细胞器功能提供了一条途径。