近红外I/II荧光蛋白(NIR-I/II FPs)对体内成像至关重要，但目前的NIR-I/II荧光蛋白面临着包括稀缺性、对发色团成熟的要求以及有限的发射波长(通常< 800 nm)等挑战。在这里，我们利用合成的寻找蛋白质的NIR-II染料作为发色团，通过位点特异性的亲核取代反应与标记蛋白(如人血清白蛋白，HSA)共价结合，从而创造出概念验证的仿生NIR-II FPs。这种化学寻蛋白策略可以在温和的生理条件下完成，无需催化。蛋白质组学分析确定了特异性结合位点(DIII上的Cys 477)。NIR-II FPs可显著提高发色团亮度和光稳定性，同时改善生物相容性，从而实现高性能的NIR-II淋巴造影和血管造影。该策略是通用的，适用于创建广泛的光谱分离NIR-I/II FPs，用于实时可视化多种生物事件。这种简单的仿生方法具有改变基于荧光蛋白的生物成像的潜力，并使原位白蛋白靶向能够创建用于活体深层组织成像的NIRI/II FPs。